Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展快速的过程中逐渐扩展

从第一次用到家兔自身免疫质三子化到用到1型式高血压临床病因的令人满意率在成年人时期就有很好的描绘，多个家兔自身免疫质三子化阳性的成年人之前有70%在血清类比后10年末患上高血压，而随访15年的成年人这一比重增大到84%。相对来说之下，占多数临床1型式高血压一半以上的型式1型式高血压的发作机制还从未得到前提的研究课题。

更加多的人开始采用分期系统来定义1型式高血压的令人满意：有机体在用到多种家兔自身免疫质三子化时进到第1前期，用到血糖极度时进到第2前期，用到病因时进到第3前期。一些多发家兔自身免疫质三子化阳性的有机体，在1期和2期，令人满意较慢，并发展为发作的1型式高血压。我们之前描绘了一四组在首次样品到多种家兔自身免疫质三子化取样后有数10年无高血压的总括慢令人满意者，这四组病人人口数极多，但特性非常指明。随后，我们发现家兔自身免疫特异性CD8+T蛋白质质三子化在令人满意加速的病人之前基本不发挥作用，但在近期发作和长期发挥作用的高血压病人之前很难以样品到。这确实说明，与令人满意病人相对来说，这些病人自身免疫质三子化的选择性增强。

早期研究课题说明，尽管选择性性T蛋白质(Treg)存量正常，但高血压病人发挥作用一些功能性缺点，其之前包括对IL-2的质三子化能力减极多。此外，高血压病人之前的现象CD4+T蛋白质确实对选择性更具抵抗性，显出有为现象T蛋白质的选择性西移动，自然导致的Treg和体外导致的游离Treg，以及免疫经历的CD4+T蛋白质之前IL-2质三子化西移动。本研究课题的目的是描绘了CD4+选择性性T蛋白质(Treg)在海岸边总括加速令人满意者之前的特性，他们的总数为43岁(31-72岁)，随访星期为18-32年。

方法：BOX研究课题是一项以一些人为基础的纵向研究课题，在21岁以下就诊的病人亲属之前检查1型式高血压的危险状况。我们之前描绘了长期加速令人满意者的特性，他们保持多重家兔自身免疫质三子化阳性超过10年，但从未用到高血压的临床病因，慢性或非顺利进行性自身免疫。随后，10名继续保持无高血压并希望提供大量血液取样的加速令人满意者归属于T和B蛋白质功能性集中研究课题。在目前的研究课题之前，8名慢令人满意者(SP四组)，之前位成年43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的家兔自身免疫质三子化阳性。所有的与会者都正处于1型式高血压令人满意的1期，尽管一些人随后失去了家兔自身免疫质三子化对某些免疫的阳性质三子化，然而，一名病人不太可能正处于2期有数6年，但从未用到临床病因，一名病人被诊断为高血压，该受试者72岁，在搜集实验取样时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据集中研究课题之前对该诱导顺利进行了单独审核。分离出有来外周血单个核蛋白质(PBMCs)，运用于多参数流式蛋白质忍术和T蛋白质选择性试验审核诱导之前Treg的kHz、性状式和功能性。采用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和重归)顺利进行无监督聚类集中研究课题，审核Treg性状式。

结果：与有益诱导相对来说，来自慢令人满意体的失忆CD4+T蛋白质的监督聚类表明，激活的失忆CD4+ TregkHz增大，与糖皮质激素游离的TNFR涉及蛋白质(GITR)解读增大有关。一名HbA1c升高的病人与令人满意加速者和意味着的小鼠相对来说，Treg谱有所多种不同。功能性集中研究课题说明，与有益诱导相对来说，来自加速令人满意体的Treg依赖性的CD4+现象T蛋白质选择性明显受损。显出有为对现象CD4+T蛋白质CD25和CD134解读的选择性增大。

平面图1 集中的性状式集中研究课题表明，CD4+Treg亚型式在慢令人满意表头之前增大。由FlowSOM分解成的Treg室，聚集在来自所有诱导的活CD4+CD45RA -蛋白质上。根据标上物解读鉴定出有10个元簇:失忆T蛋白质_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;失忆T cell_4;CD49b失忆T蛋白质;HLA-DR + GITR +失忆T蛋白质;文件系统Treg_1;文件系统Treg_2;文件系统Treg_3;和文件系统Treg_4。(a)采用9个多种不同Treg标上分解成的10个元簇的MST。每个路由值得一提的是一个坦克部队(100个坦克部队)，更大的元坦克部队(10个元坦克部队)在路由四组周围上色。每个路由之前的饼平面图透露单个标上的解读级别。(b)每个元聚类的热平面图，以表明整体标上解读。(c, d)为HD四组(c)和SP四组(d)分解成平面图，以及FlowSOM标记的每个元簇的覆盖层。(e-l)相较稀土元素为每个metacluster箱内本站平面图(稀土元素> 0.05%)确定为HD和SP四组:文件系统Treg_2 (e),文件系统Treg_3 (f),文件系统Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +失忆T蛋白质(h)、失忆T cell_1(i),失忆T cell_2 (j),失忆T cell_3 (k) n d CD49b失忆T蛋白质(l)。绿色边框值得一提的是**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩核查。此键适用于平面图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

平面图2 采用CITRUS的预测证实，TregkHz的增大是令人满意加速的标志。分级门控(a - f)和柑橘集中研究课题(g-k)比较SP与会者和意味着的HD与会者在CD4+CD45RA−T蛋白质上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群体的值得一提的是性平面图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3钼，然后通过HLA-DR和GITR解读顺利进行分离出有来，虚拟FlowSOM群体。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)四组以及诱导SP 606(绿色)之前CD25+ cd127的kHz综合平面图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控闭包的箱内本站平面图;(c) HLA-DRloGITR−(文件系统Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(文件系统Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(文件系统Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+文件系统T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3解读低压着色，边框突出有的簇被标记为SP和HD表头之间的多种不同。(j)箱内本站平面图表明了在SP(蓝点)和HD(灰点)四组之前，CITRUS失忆Treg_3和Treg_4的相较稀土元素(比重)。(k)直方平面图表明每个簇的性状式(粉红色)和Treg标上相较解读与历史背景解读(黄色);上列，文件系统Treg_3;请注意即刻，文件系统Treg_4。历史背景与所有其他簇之前标上的解读有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩核查

平面图3 与有益献血者相对来说，令人满意加速者失忆treg的GITR增大。每个失忆CD4+T蛋白质元簇(失忆T蛋白质_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;CD49b +失忆T蛋白质;HLA-DR + GITR +失忆T蛋白质;文件系统Treg_2;文件系统Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)样品每个解读标上的推移。(a,b)来自HD (a)和S (b)表头的解读热平面图(sp606不包括在内)。(c,d)失忆Treg_4元簇之前所有HD(灰色)、所有SP(黄色)和SP 606(绿色)的FlowSOM GITR解读串联，表明直方平面图(c)和综合平面图(d)。Wilcoxon配对符号秩和核查，p< 0.07(绿色)所有诱导包括，p< 0.05(黄色)诱导SP 606和意味着的HD不包括在测试之前。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs之前GITR解读，从分级门控，从所有HD(灰色)、所有SP(黄色)和SP 606(绿色)串联，表明直方平面图(e)和综合平面图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩核查

平面图4 来自加速令人满意的CD4+ treg蛋白质管控现象CD4+T蛋白质的能力减极多。SP四组用黄色的本站和边框透露，HD四组用黑色的本站和边框透露，绿色的本站/边框透露诱导sp606。采用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白质顺利进行分选。CD4+CD25−(应答者)被标上为CFSE, Treg按仔细观察的比重溶液。用抗CD3 /28微珠游离蛋白质，培养3在此之后顺利进行流式蛋白质忍术样品。(a-d)与CD4+应答者相较应的treg培养(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD应答者培养。(a,b,f) CFSE游离(a,e)和CFSE选择性%-(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的选择性%-。采用阳性对照(激活的号召蛋白质不含treg)计算选择性%-。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差集中研究课题。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

平面图5 现象CD4+T蛋白质对加速令人满意的T蛋白质游离的选择性更敏感。SP四组用黄色的本站和边框透露，HD四组用黑色的本站和边框透露，绿色的本站/边框透露诱导sp606。采用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白质顺利进行分选。CD4+CD25−(应答者)被cfsel标上，treg按仔细观察的比重溶液。用抗CD3 /28微珠游离蛋白质，培养3在此之后顺利进行流式蛋白质忍术(CD25反染)和蛋白质因三子集中研究课题。HD Treg与HD、SP或sp606应答者主导培养。(a,b) CFSE游离(a)和CFSE选择性%-(b)。(c,d) CD25选择性%-(c)和CD134选择性%-(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培养之前的解读。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差集中研究课题。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

推论：我们得出有的推论是，来自加速令人满意三子的游离失忆CD4+Treg在GITR解读之前得到了拓展和丰富，强调了进一步研究课题Treg在1型式高血压风险有机体之前的异质性的必要性。

标题说是：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28